實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

腸神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)細胞類似神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質(zhì)細胞，腸神經(jīng)系統(tǒng)以網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)廣泛分布于漿膜下層、縱肌層、肌間層、環(huán)肌層、深肌層、粘膜肌層和粘膜層。腸神經(jīng)膠質(zhì)主要位于腸肌間叢和粘膜下叢神經(jīng)節(jié)，與神經(jīng)節(jié)交織成團并與節(jié)間神經(jīng)束相互連接。

腸神經(jīng)膠質(zhì)不但對神經(jīng)系統(tǒng)起支持作用，還在調(diào)控神經(jīng)元生長、發(fā)育、神經(jīng)回路功能和細胞凋亡過程中起重要作用。

細胞特性：

1） 組織來源于實驗動物的正常腸組織。

2) 細胞鑒定：GFAP熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5) 細胞生長方式：不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf原代星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)體系 作為該細胞的培養(yǎng)試劑。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠成纖維細胞生長因子10(FGF10)檢測試劑盒 ，英文名： FGF10 ELISA Kit

Mouse C reactive protein (CRP) ELISA Kit 小鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測試劑盒

ELISA 小鼠肌酸激酶(mouse CK)  進口分裝

CLIAKitforLensculinarisagglinin,LCAELISAKit扁豆凝集素

通用型HSV2(HERPESSIMPLX2)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次

ELISAKitapo-A1猴載脂蛋白A1

GP140重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 gp140 蛋白 (group M, subtype CRF07_BC) (Fc 標簽) Protein

Tie1/JTK14 peptide 上皮生長因子樣域酪激酶1抗原 0.5mgTie1/JTK14 peptide 上皮生長因子樣域酪激酶1抗原

IL18RAP重組人 IL18RAP / IL1R7 蛋白 (Fc 標簽) Protein

GGT5 Protein Human 重組人 GGT5 / GGTLA1 蛋白 (ECD, His 標簽)

LDLR Protein Human 重組人 LDLR / LDL Receptor 蛋白

Tie1/JTK14 peptide 上皮生長因子樣域酪激酶1抗原 0.5mgTie1/JTK14 peptide 上皮生長因子樣域酪激酶1抗原

GGT5 Protein Human 重組人 GGT5 / GGTLA1 蛋白 (ECD, His 標簽)

GP140重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 gp140 蛋白 (group M, subtype CRF07_BC) (Fc 標簽) Protein

LDLR Protein Human 重組人 LDLR / LDL Receptor 蛋白

IL18RAP重組人 IL18RAP / IL1R7 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠白介素28(IL-28)檢測試劑盒 96T/48T

Rat chorionic gonadoophin (CG) ELISA Kit 大鼠絨毛膜(CG)檢測試劑盒

Humansolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit 人可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humancarbonicanhydrase2,CA-2檢測試劑盒人酶2(CA-2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組腺病毒包裝試劑盒1套

HumansolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit人可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠腸神經(jīng)膠質(zhì)細胞兔子可溶性P選擇素(sP-selectin)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子抗中性粒細胞顆粒抗體(ANGA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子巨噬細胞性蛋白5(MIP-5)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝