實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠淋巴血管內(nèi)皮分離自淋巴血管組織；淋巴管由毛細淋巴管匯合而成。其形態(tài)結(jié)構(gòu)與靜脈相似，但管徑較細，管壁較薄，瓣膜較多且發(fā)達，外形呈串珠狀。淋巴管根據(jù)其位置分為淺、深二種。它們管位于皮下，常與淺靜脈伴行，收集皮膚和皮下組織的淋巴。深淋巴管與深部血管伴行，收集肌肉和內(nèi)臟的淋巴。淺、深淋巴管之間有廣泛的交通支。淋巴管在向心行程中，通常經(jīng)過一個或多個淋巴結(jié)，從而把淋巴細胞帶入淋巴液。主要功能是濾過淋巴液，產(chǎn)生淋巴細胞和漿細胞，參與機體的免疫反應(yīng)。當(dāng)局部感染時，細菌、病毒或癌細胞等可沿淋巴管侵入，引起局部淋巴結(jié)腫大。如該淋巴結(jié)不能阻止和消滅它們，則病變可沿淋巴管的流注方向擴散和轉(zhuǎn)移。淋巴管內(nèi)皮細胞（LEC）是襯覆于淋巴管內(nèi)表面的一種單層扁平上皮，是構(gòu)成淋巴管壁的主要結(jié)構(gòu)，參與維持體液平衡，調(diào)節(jié)淋巴細胞再循環(huán)和機體的免疫反應(yīng)和組織液及蛋白質(zhì)的運輸，在疾病過程中也起著重要作用。近年研究表明，LEC還在傷口愈合、淋巴管水腫和炎癥擴散等病理過程中起重要作用，而且與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。淋巴管內(nèi)皮細胞主要功能：①調(diào)節(jié)體液、蛋白和組織壓力平衡；②為免疫系統(tǒng)的重要組成部分。淋巴管內(nèi)皮細胞與主要病生理變化：①囊腫型淋巴管瘤；②淋巴管炎；③淋巴結(jié)核。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠淋巴血管內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的小鼠淋巴血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠淋巴血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠血管生成素4(ANGPT4)檢測試劑盒 ，英文名： ANGPT4 ELISA Kit

Mouse prostatic acid phosphatase (PAP) ELISA Kit 小鼠前列腺酸性0酸酶(PAP)檢測試劑盒

Mouseplaceagrowthfactor,PLGFELISAkit 小鼠胎盤生長因子(PLGF)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanBeta-lactamaseELISAKit人β內(nèi)酰胺酶

細胞DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒20次

ELISAKitAIF大鼠凋亡誘導(dǎo)因子

HA重組甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

pre S1/S2 protein [HBV] 乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2(抗原 0.5mgpre S1/S2 protein [HBV] 乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2(抗原)

AKT1重組人 AKT1 / PKB / PKBα 蛋白 Protein

CTF1 Protein Human 重組人 Cardiotrophin-1 / CTF1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

DPP7 Protein Human 重組人 DPP7 / DPPII / DPP2 蛋白

pre S1/S2 protein [HBV] 乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2(抗原 0.5mgpre S1/S2 protein [HBV] 乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2(抗原)

CTF1 Protein Human 重組人 Cardiotrophin-1 / CTF1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

HA重組甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

DPP7 Protein Human 重組人 DPP7 / DPPII / DPP2 蛋白

AKT1重組人 AKT1 / PKB / PKBα 蛋白 Protein

小鼠腦素/腦尿肽(BNP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human caneous T cell atacting chemokine (CTACK/CCL27) ELISA Kit 人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)檢測試劑盒

HumanGrowthHormoneBindingProtein,GHBPELISAKit 人生長激素結(jié)合蛋白(GHBP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human50%complemehemolysis,CH50檢測試劑盒人血清總補體(CH50)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母總巰基含量熒光定量檢測試劑盒20次

Mouseai-thrombieceptor,AELISAKit小鼠抗受體(A)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠淋巴血管內(nèi)皮細胞小鼠抗酸性0酸酶檢測試劑盒   小鼠抗酸性0酸酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠抗酸性0酸酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗酸性0酸酶試劑盒、小鼠抗酸性0酸酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠解整合素樣金屬蛋白酶檢測試劑盒   小鼠解整合素樣金屬蛋白酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠解整合素樣金屬蛋白酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠解整合素樣金屬蛋白酶試劑盒、小鼠解整合素樣金屬蛋白酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠堿性0酸酶檢測試劑盒   小鼠堿性0酸酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠堿性0酸酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠堿性0酸酶試劑盒、小鼠堿性0酸酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠甲基化酶檢測試劑盒   小鼠甲基化酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠甲基化酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠甲基化酶試劑盒、小鼠甲基化酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。