霉菌是發(fā)酵工業(yè)產(chǎn)品的重要菌種，特別是抗生素和酶制劑。霉菌雜交育種是利用霉菌的準(zhǔn)性生殖過程中的基因重組和分離現(xiàn)象，將不同菌株的優(yōu)良特性集合到一個新菌株中去，從中篩選出具有高產(chǎn)和優(yōu)良特性的新菌株。ELISA試劑盒

1.異核體的形成

(1)直接親本的選擇 用來進(jìn)行雜交的兩個野生型菌株叫原始親本，它們在基本培養(yǎng)基上能夠形成豐富的孢子，并且具有較強的重組性能。原始親本經(jīng)過誘變以后得到各種突變型菌株，假設(shè)這種菌株是用來作為形成異核體的親本，就叫直接親本。直接親本形態(tài)上必須穩(wěn)定，其原始菌株還要攜帶明顯營養(yǎng)標(biāo)記和輔助標(biāo)記等生理特性，如營養(yǎng)缺陷型、耐藥性、產(chǎn)量特性等，目前應(yīng)用普遍的是營養(yǎng)缺陷型菌株。

(2)異核體的形成異核體是由兩種不同基因型的菌絲細(xì)胞融合產(chǎn)生的，只有具有交醞型的菌株才能形成異核體。由兩個含有不同營養(yǎng)缺陷型標(biāo)記的直接親本經(jīng)細(xì)胞融合形成的異核體由于已經(jīng)進(jìn)行了質(zhì)配，因此異核體在生長過程中具有了親本細(xì)胞各自缺陷的營養(yǎng)生長能力，這就是營養(yǎng)互補作用，使得異核體能在基本培養(yǎng)基上生長。異核體形成的過程是要將兩個直接親本菌株的分生孢子或菌絲體進(jìn)行混合接種、培養(yǎng)，使兩個配對菌株的細(xì)胞彼此接觸，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞壁融合和細(xì)胞質(zhì)交流，產(chǎn)生異核體。主要方法有*培養(yǎng)基混合法、基本培養(yǎng)基銜接法和有限培養(yǎng)基培養(yǎng)法。

①*培養(yǎng)基混合法將配對菌株的孢子混合接種在液體*培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待長出幼嫩菌絲后，用生理鹽水洗滌離心數(shù)次，除去黏附的培養(yǎng)基，把菌絲撕碎，并涂布于基本培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，直至長出異核體的菌絲叢，挑取其上的孢子移到基本培養(yǎng)基舒面上保存。此法特別適合于兩個直接親本的分生孢子不易融合的情況。ELISA試劑盒

    另一種*培養(yǎng)基混合法是把兩個直接親本的分生孢子混合接種于*培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)5～8天后，形成為數(shù)很少的異核體，進(jìn)一步純化分離，可以獲得異核體的單個菌落，移接到基本培養(yǎng)基上保存。

②基本培養(yǎng)基銜接法取兩個親本菌株新鮮斜面上的分生孢子，用生理鹽水洗滌數(shù)次，制成高濃度的孢子懸浮液，分別從上至下和從下至上涂接到基本培養(yǎng)斜面上，接種長度約為斜面的2／3，而兩菌株接種的銜接部分約為1／3。培養(yǎng)后，銜接部分長出異核體菌絲叢。進(jìn)一步考證、純化，移人斜面保存。該法獲得異核體頻率很高。

③有限培養(yǎng)基培養(yǎng)法有限培養(yǎng)基(LM)是由*培養(yǎng)基和基本培養(yǎng)基以1：9比例組成。有限培養(yǎng)基培養(yǎng)法可分為液體靜止培養(yǎng)法和固體平板培養(yǎng)法兩種。液體靜止法是在液體有限培養(yǎng)基中接入兩個配對菌株的分生孢子，培養(yǎng)l～2天后，將長出的幼嫩菌絲撕碎，涂布于基本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)6～8天，將長出的異核體菌絲叢移人斜面保存。固體平板培養(yǎng)法是將兩個配對菌株的分生孢子等量混合制成孢子懸浮液，涂布到有限培養(yǎng)基瓊脂平板上，培養(yǎng)6～8天后，在兩個親本菌落間形成異核體菌絲叢。

(3)異核體的檢出 在進(jìn)行異核體檢出時尤其要排除由親本互養(yǎng)產(chǎn)生的菌落。所謂互養(yǎng)是指，有時兩個不同營養(yǎng)缺陷的親本菌株在基本培養(yǎng)基上生長時．由于彼此十分靠近，盡管沒有發(fā)生細(xì)胞融合，但產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物通過培養(yǎng)基的滲透可以互為對方所利用，彌補各自的營養(yǎng)缺陷，從而可以在基本培養(yǎng)基上生長。由于發(fā)生互養(yǎng)現(xiàn)象的親本菌株間并沒有發(fā)生遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)移，因而可以在接下來的篩選中排除，篩選出真正的異核體。主要方法有：①把以上異核體菌絲叢中的菌絲，單*條一條地挑取，置于基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)，凡是能重新形成菌落的，即為異核體，這種方法可以排除互養(yǎng)菌株。②把異核體菌落上的大量分生孢子涂布在基本培養(yǎng)基上．如能形成為數(shù)不多的雜合二倍體菌落，則為真正的異核體，否則就不是異核體；或者將異核體菌落培養(yǎng)到一定時間，在*的異核體孢子顏色的菌落上，出現(xiàn)類似野生型孢子顏色角變或斑變的雜臺二倍體，說明菌落確是由異核體形成的。ELISA試劑盒

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